目前，抗體類藥物已成為腫瘤免疫或自身免疫性疾病治療的熱門研究方向，不同單抗應對腫瘤的作用機制也不盡相同。常見的抗腫瘤作用機制包括中和/阻斷腫瘤特異性生長因子受體或免疫調(diào)節(jié)因子，以及發(fā)揮抗體結構上的效應功能即利用補體和細胞介導腫瘤細胞溶解。

一、CDC效應的概念

抗體的結構決定了其作用機制，抗體由Fab端和Fc端組成。其中Fab端可通過識別游離的分子（如VEGF）和細胞表面分子（如CD20，CD19）執(zhí)行其功能）；而Fc端則決定了抗體的效應功能，比如今天所要介紹的補體依賴性細胞毒性作用（Complement dependent cytotoxicity; CDC）。

補體系統(tǒng)是重要的免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)，補體及其補體系統(tǒng)是由多種血清蛋白組成的級聯(lián)酶促反應，其家族成員超過40種蛋白質(zhì)，且這些蛋白相互調(diào)控補體系統(tǒng)的三條重要途徑為經(jīng)典途徑（Classical Pathway，CP）、凝集素途徑（Lectin Pathway，LP）和替代途徑（Alternative Pathway，AP）。補體依賴的細胞毒性，指的是補體參與的細胞毒作用，即通過特異性抗體與細胞膜表面相應抗原結合，形成復合物而激活補體經(jīng)典途徑，所形成的攻膜復合物（MAC）對靶細胞發(fā)揮裂解效應。

補體經(jīng)典途徑由C1q分子起始。當抗體如IgG的Fab端與靶細胞上的抗原相結合后，IgG的Fc區(qū)域發(fā)生相互作用、聯(lián)結，進一步暴露出C1q的位點。C1q是補體系統(tǒng)的第一個蛋白，它可以識別并結合到抗體上的補體結合位點，從而發(fā)生構型改變，隨后激活C1r和基于Ca2+存在下具有酶活性的C1s。C1r和C1s開始引發(fā)一系列的級聯(lián)反應，并涉及到C4,C2,C3,C5,C6,C7,C8和C9等補體家族成員。隨后，C5b、C6-C9再組裝成MAC并在細胞膜上鑿孔，最終引起細胞裂解。

圖片來源：Complement System: a Neglected Pathway in Immunotherapy.

二、影響CDC作用的因素及檢測方法

目前已知的影響CDC效應的因素為5點。

抗體亞型：通常，CDC效應強弱（或活化C1q能力高低）的抗體亞型比較為：IgM＞IgG3＞IgG1＞IgG2。IgG4不具備激活補體經(jīng)典途徑的能力，但是凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。

靶細胞抗原的表達水平：靶細胞表面的抗原需足夠多才可激活補體，若抗原表達水平較低時，補體不被激活。

補體調(diào)節(jié)蛋白：靶細胞表面或內(nèi)部及血清中存在的部分蛋白可以調(diào)節(jié)補體的活性，進而影響CDC效應。

補體來源：通常選用人源或SPF級空白食蟹猴血清作為試驗中補體的來源，鼠源血清對細胞有毒害作用但沒有CDC效應。（來自食蟹猴的未滅活血清可用于表達靶抗原的人類靶細胞的CDC檢測。）

抗原-抗體結合方位：抗原-抗體的結合方位及相鄰抗體的排列方式會顯著影響CDC效應。

圖片來源：Complement System: a Neglected Pathway in Immunotherapy.

CDC檢測的流程通常為將靶細胞、待測抗體和作為補體來源的血清于37℃下共同孵育1-24小時，即可檢查裂解后的死細胞或活細胞。目前常用的檢測方法為：熒光染料（如PI）標記死細胞，臺盼藍標記死細胞，calcein-AM標記活細胞，Alamar blue標記活細胞，CCK-8檢測細胞活力，51Cr釋放實驗等。

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